ABSTRACT
Background: cryopreservation decreases sperm viability by approximately 50%. Objective: the objective of this study was to determine the effect of the addition of seminal plasma proteins on post-thawing sperm viability in Sanmartinero and Zebu semen. Methods: semen samples from 10 bulls of each breed were used, and seminal plasma was subjected to two-dimensional electrophoresis to establish the relationship between the relative amount of each protein spot and sperm viability. Then, seminal plasma was subjected to exclusion chromatography to separate the fraction containing these proteins. This fraction was added in doses of 0.5, 1.0, 1.5 and 2.0 mg, to 1 x 10(6). Sperm was thawed and incubated at 37 °C for 1 h to determine its effect on postthaw viability. Sperm were frozen using two media (citrate-fructose-yolk and Bioxcell®). Results: we found one protein spot (16.20 kDa, PI 5.5) in Sanmartinero seminal plasma that correlated (r = 0.64 p<0.001) with viability. This spot was found in 21-25 chromatography fractions. The percentage of post-thaw viable sperm increased 20% (p<0.05) at 1.0 and 1.5 mg of the fraction when sperm was frozen using citrate-fructose-yolk; it increased 25% (p<0.01) with 0.5 mg when it was frozen with Bioxcell® media. Addition of 0.5 mg of the fraction to semen cryopreserved with Bioxcell® resulted in a greater (p<0.05) percentage increase of viable sperm in Sanmartinero semen (23 ± 8.3%) compared with Zebu semen (6.0 ± 2.0%). Conclusions: these results show that seminal plasma proteins decrease cryopreservation damage in sperm. The effect depends on the cryoprotectant dose as well as the breed of bull.
Antecedentes: la criopreservación disminuye la viabilidad espermática por debajo del 50%. Objetivo: el objetivo de esta investigación fue determinar el efecto de la adición de proteínas del plasma seminal sobre la viabilidad espermática post-descongelación de semen de toros Sanmartinero y Cebú. Métodos: se colectó semen de 10 toros de cada raza, y el plasma seminal se sometió a electroforesis bidimensional, para establecer la relación entre la cantidad relativa de cada punto de proteína y la viabilidad espermática. Identificados dichos puntos, el plasma seminal se sometió a cromatografía de exclusión para separar la fracción que contenía estas proteínas. Esta se adicionó en dosis de 0,5, 1,0, 1,5 y 2,0 mg, a muestras de 1 x 10(6) espermatozoides, descongelados e incubados a 37 °C durante 1 hora, para determinar su efecto en la viabilidad post-descongelación. Los espermatozoides se congelaron usando dos medios (citrato-fructosa-yema y Bioxcell®). Resultados: se encontró un punto de proteína (16,20 kDa, punto Isoeléctrico 5,5) en plasma de toros Sanmartinero, que correlacionó (r = 0,64 p<0,001) con la viabilidad. Este punto de proteína se encontró en la fracción 21-25 de la cromatografía. El porcentaje de espermatozoides viables post-descongelación aumentó 20% (p<0,05) con dosis de 1 y 1,5 mg de la fracción, cuando los espermatozoides se congelaron en medio citrato-fructosa-yema; y 25% (p<0,01) con dosis de 0,5 mg cuando se congelaron en medio Bioxcell®. La adición de 0,5 mg de la fracción a semen descongelado previamente criopreservado en medio Bioxcell®, evidenció un incremento mayor (p<0,05) en el porcentaje de espermatozoides viables de semen de toros Sanmartinero (23 ± 8,3 %), que en semen de toros Cebú (6,0 ± 2,0%). Conclusiones: los resultados anteriores demuestran que las proteínas del plasma seminal disminuyen el daño en los espermatozoides por la criopreservación, y que el efecto de estas proteínas depende del medio de congelación, la dosis adicionada y la raza de los toros.
Antecedentes: a criopreservação diminui a viabilidade espermática abaixo de um 50%. Objetivo: o objetivo desta pesquisa foi determinar o efeito da adição de proteínas do plasma seminal na viabilidade espermática pós-descongelamento de sêmen de touros das raças Sanmartinero y Zebú. Métodos: coletou-se sêmen de 10 touros de cada raça, as amostras do plasma seminal foram submetidas à eletroforese bidimensional, para estabelecer a relação entre a quantidade relativa de cada ponto de proteína e a viabilidade espermática. Ao serem identificados os pontos, o plasma seminal também foi submetido ao processo de cromatografia por exclusão para separar a fração que continha as proteínas. A fração foi adicionada nas doses de 0,5, 1,0, 1,5 y 2,0 mg, amostras de 1 x 106 espermatozoides, em descongelamento e incubados à temperatura de 37 ° C durante 1 hora, para determinar o efeito na viabilidade pós-descongelamento. Os espermatozoides foram congelados utilizando dois meios (Citrato- frutose-gema e Bioxcell®). Resultados: encontrou-se um ponto de proteína (16,20 kDa, ponto Isoelétrico 5,5) no plasma de touro Sanmartinero, que correlacionou (r=0,64 p<0,001) com a viabilidade. Esse ponto de proteína foi encontrado na fração 21-25 da cromatografia. O percentagem de espermatozoides viáveis pós-descongelamento aumentou em 20% (p<0,05) nas doses de 1 y 1,5 mg da fração, quando os espermatozoides foram congelados em meio de citrato-frutose-gema; e 25% (p<0,01) com doses de 0,5 mg congelados em meio Bioxcell®. A adição de 0,5 mg da fração ao sêmen descongelado e previamente criopreservado em meio Bioxcell®, evidenciou um incremento maior (p<0,05) no percentagem de espermatozoides viáveis do sêmen de touros Sanmartinero (23 ± 8,3 %), do que em sêmen de touros zebu (6,0 ± 2,0%). Conclusões: os anteriores resultados demonstram que as proteínas do plasma seminal diminuem o dano nos espermatozoides pela criopreservação e que o efeito destas proteínas depende do meio de congelação, a dose adicionada e a raça dos touros.
ABSTRACT
A través del presente estudio se analizaron plasmas sanguíneos de seis especies, incluyendo el humano tanto en estado gestante como no gestante, identificándose por primera vez en plasma, la glicoproteína α2-Macroglobulina (α2-M) de ovino de pelo (Ovis aries) y de búfalo (Bubalus bubalis). La presencia de esta proteína en el plasma sanguíneo de todas las especies en estudio se demostró mediante electroforesis en gel de poliacrilamida usando sodio dodecilsulfato como agente denaturante (SDS PAGE) al 7.5% identificándose como bandas de 180 kDa y en forma no denaturante PAGE 5% como bandas de 720 kDa. Estas últimas bandas fueron claramente intercambiables de la forma tetramérica a la forma monomérica en los ensayos electroforéticos. Como controles se usaron la α2-M (tetramérica) y la proteína de la zona de gestación (PZP) (dimérica) purificadas a un 98%; así como, las bandas de estas dos proteínas en el plasma humano. El análisis de la secuencia del dominio N-terminal de la (α2-M) de ovino de pelo, fue muy similar al de la proteína humana purificada. Tanto la α2-M humana como la bovina llegaron a ser activadas a la forma rápida por medio de la reacción con metilamina. Lo anterior demuestra diferencias en la reactividad de las α2-M animales con la amina primaria cuando se comparan los resultados con la forma rápida de la α2-M humana. Será necesario unificar los métodos de purificación de esta proteína en todas las especies, de tal manera que los dominios sensibles de las α-macroglobulinas (tioιster y región señuelo) tengan el mismo tratamiento y el mismo grado de desnaturalización para todas las preparaciones de α2-M.
Blood plasma from six different non pregnant and pregnant species, including human blood plasma, was analyzed for detection of α2-Macroglobulin (α2-M). The tropical hair sheep (Ovis aries) and the buffalo (Bubalus bubalis) were studied for the first time in Colombia. The presence of the α2-M in plasma of all the species was demonstrated by SDS 7.5% PAGE as bands of 180 kDa as well as by non-denaturing 5% PAGE with bands of 720 kDa. The tetrameric form α2-M (tetramérica) and the pregnancy zone protein (PZP) (dimeric) purified at 98%, as well as its corresponding bans from human plasma were used as control. The N-terminal sequence of the band of 180 kDa in Tropical hair sheep plasma was very similar to the purified human α2-M. The results indicated the presence of α2-M in blood plasma of all the species tested, while the PZP was present only in the pregnant human plasma. Both human and bovine α2-M became activated with the fast form by reacting with Methylamine. This Fac. demonstrates the differences in the reactivity of the animal’s α2-M with primary amine as compared with the human α2-M. It could be necessary to unify purification methods into one method for all species, so that the sensitive domain of the α-macroglobulins (thiolester and bait region) receives the same treatment and grade of denaturation for all α2-M preparation.
ABSTRACT
El aumento moderado de la concentración de homocisteína (Hcy) en sangre es considerado un factor de riesgo para enfermedades cardiovasculares Objetivo: determinar la concentración de Hcy en individuos sanos de la ciudad de Medellín. Material y métodos: se seleccionaron 57 individuos que decidieron voluntariamente participar. De éstos, se incluyeron 48 (30 mujeres y 18 hombres). Con un promedio de edad de 35±3,5 años, sin antecedentes de alteración metabólica, manifestación clínica de hipertensión arterial o de enfermedades cardiovasculares. Resultados: la concentración promedio de Hcy plasmática en ayuno fue de 8,5 ± 3,7 ymoles/l (intervalo de confianza del 95 por ciento 7,45 - 9,54 ymoles/l para el grupo en general). Por género, el promedio fue de 7.6+2.7 ymoles/l en las mujeres (intervalo de confianza 95 por ciento de 6,6 - 8,6 ymoles/I) y de 10.1 ±4,7 ymoles/l en los hombres (intervalo de confianza 95 por ciento de 7,9 - 12,3 ymoles/l). Esta fue significativamente mayor en los hombres que en las mujeres (p < 0.02). El limite superior normal fue de 13,0 ymoles/l en las mujeres y de 19,5 ymoles/l en los hombres. El 8,3 por ciento presentó hiperhomocisteinemia moderada (dos hombres y dos mujeres). Conclusión: los resultados de esta primera aproximación a la concentración de Hcy en una población colombiana sugieren que ésta difiere de la de otros países y confirma las diferencias entre hombres y mujeres. Estos datos deben ser confirmados por un estudio que involucre un mayor número de individuos y que determine su importancia como factor de riesgo en la población general y en pacientes con enfermedades cardiovasculares.